Определение энтеробактерий гост

У нас вы можете скачать определение энтеробактерий гост в fb2, txt, PDF, EPUB, doc, rtf, jar, djvu, lrf!

Агар желчный фиолетово-красный сухой ТУ Среда используется для количественного учета бактерий группы кишечных палочек БГКП в молоке и молочных продуктах Не имеет регистрационного удостоверения, не предназначено для медицинских целей на территории РФ. Сухая питательная среда Левина Агар с зозин-метиленовым синим по ТУ Среда дифференциально-диагностическая, используется для выделения энтеробактерий при санитарных исследованиях продуктов питания, сырья и объектов внешней среды Не имеет регистрационного удостоверения, не предназначено для медицинских целей на территории РФ.

Среда Козера для идентификации БГКП Посев в среду Козера используется для определения способности микроорганизмов утилизировать цитраты Не имеет регистрационного удостоверения, не предназначено для медицинских целей на территории РФ. Магниевая среда ТУ Среда содержит хлорид магния; она предназначена для накопления и выделения патогенных энтеробактерий при санитарных исследованиях продуктов питания, сырья и объектов внешней среды Не имеет регистрационного удостоверения, не предназначено для медицинских целей на территории РФ.

Среда Плоскирева ТУ Среда предназначена для выделения бактерий родов Shigella и Salmonella при санитарных исследованиях продуктов питания, сырья и объектов внешней среды Не имеет регистрационного удостоверения, не предназначено для медицинских целей на территории РФ.

Среда Олькеницкого ТУ Среда предназначена для дифференциации энтеробактерий по способности сбраживать углеводы в присутствии индикатора и железосульфатного комплекса Не имеет регистрационного удостоверения, не предназначено для медицинских целей на территории РФ. Среда Клиглера ТУ Сухая питательная среда типа Клиглера используется для идентификации энтеробактерий по способности сбраживать углеводы и продуцировать сероводород Не имеет регистрационного удостоверения, не предназначено для медицинских целей на территории РФ.

Среда Ресселя Среда предназначена для идентификации энтеробактерий по способности ферментировать углеводы Не имеет регистрационного удостоверения, не предназначено для медицинских целей на территории РФ. Среда Кесслер с глюкозой Не имеет регистрационного удостоверения, не предназначено для медицинских целей на территории РФ.

Буферный бульон Мак Конки Не имеет регистрационного удостоверения, не предназначено для медицинских целей на территории РФ. Буферный глюкозный бульон с бриллиантовым зеленым и желчью Не имеет регистрационного удостоверения, не предназначено для медицинских целей на территории РФ. Фенилаланин агар сухая питательная среда по ГОСТ Среда предназначена для идентификации энтеробактерий по способности дезаминировать фенилаланин Не имеет регистрационного удостоверения, не предназначено для медицинских целей на территории РФ.

Ацетатный агар Среда предназначена для родовой идентификации энтеробактерий по способности утилизировать ацетат натрия; применяется для контроля пищевых продуктов при подозрении на присутствие в них шигелл Не имеет регистрационного удостоверения, не предназначено для медицинских целей на территории РФ.

Агар Кристенсена с мочевиной Сухая питательная среда применяется для биохимической идентификации бактерий рода Salmonella Не имеет регистрационного удостоверения, не предназначено для медицинских целей на территории РФ. Питательный бульон L-триптофаном Сухая питательная среда предназначена для биохимического подтверждения принадлежности выделенных культур к бактериям рода Salmonella Не имеет регистрационного удостоверения, не предназначено для медицинских целей на территории РФ.

Лаурил сульфат триптозный бульон сухая селективная обогатительная среда для выявления колиформных бактерий по ГОСТ Р Не имеет регистрационного удостоверения, не предназначено для медицинских целей на территории РФ. Кристалл виолет нейтральный красный желчный лактозный агар VRBL-агар для определения количества колиформных бактерий по ГОСТ Р Не имеет регистрационного удостоверения, не предназначено для медицинских целей на территории РФ.

Агар лактозный с бриллиантовым зеленым и фиолетовым красным для определения и учета колиформных бактерий по ГОСТ Р Не имеет регистрационного удостоверения, не предназначено для медицинских целей на территории РФ. Селективная обогатительная среда бульон с лаурилсульфатом натрия для обнаружения презумптивных бактерий Escherichia coli по ГОСТ Р Не имеет регистрационного удостоверения, не предназначено для медицинских целей на территории РФ.

ЕС-бульон сухая селективная среда для обнаружения и определения числа презумптивных бактерий Escherichia coli по ГОСТ Р Не имеет регистрационного удостоверения, не предназначено для медицинских целей на территории РФ. Пептонная безиндольная вода сухая среда для идентификации бактерий Escherichia coli по ГОСТ Р Не имеет регистрационного удостоверения, не предназначено для медицинских целей на территории РФ.

Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет. В настоящий стандарт включены дополнительные по отношению к международным стандартам ИСО и ИСО требования, отражающие потребности национальной экономики государств, указанных в предисловии, а именно: Рост факультативно-анаэробных бактерий возможен на поверхности среды и этот поверхностный рост облегчает дальнейшую идентификацию бактерий, метод посева на поверхность агаризованной среды предусмотрен ГОСТ Не включены в настоящий стандарт: Настоящий стандарт распространяется на пищевые продукты, а также корма для животных, пробы окружающей среды в сфере производства и обработки пищевых продуктов и устанавливает: Метод НВЧ применяют для пищевых продуктов, содержащих в 1 г твердого продукта не более или в 1 см жидкого продукта не более 15 колониеобразующих единиц КОЕ бактерий семейства Enterobacteriaceae.

Метод посева в агаризованные селективно-диагностические среды применяют для пищевых продуктов, содержащих в 1 г твердого продукта не менее или в 1 см жидкого продукта не менее 15 колониеобразующих единиц КОЕ бактерий семейства Enterobacteriaceae. Метод посева на агаризованные селективно-диагностические среды применяют для пищевых продуктов, содержащих в 1 г твердого продукта не менее или в 1 см жидкого продукта не менее КОЕ бактерий семейства Enterobacteriaceae. Примечание - Метод посева на поверхность агаризованной среды предусмотрен ГОСТ и введен дополнительно в связи с тем, что рост факультативно-анаэробных бактерий возможен на поверхности среды и этот поверхностный рост облегчает дальнейшую идентификацию бактерий.

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты: ГОСТ Молоко и молочные продукты. Общие требования и рекомендации по микробиологическим исследованиям ГОСТ Стекла предметные для микропрепаратов.

Технические условия ГОСТ Приготовление растворов реактивов, красок, индикаторов и питательных сред, применяемых в микробиологическом анализе ГОСТ ГОСТ Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. ГОСТ Продукты пищевые и вкусовые. Методы отбора проб для микробиологических анализов Примечание - При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодному информационному указателю "Национальные стандарты", который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по выпускам ежемесячного информационного указателя "Национальные стандарты" за текущий год.

Если ссылочный стандарт заменен изменен , то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться замененным измененным стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку. В настоящем стандарте применены следующие термины с соответствующими определениями: Факультативно-анаэробные грамотрицательные палочки, не образующие спор , которые образуют типичные колонии на агаризованных селективно-диагностических средах, сбраживают глюкозу, с образованием или без образования газа , и дают отрицательную реакцию на оксидазу.

Определение присутствия или отсутствия бактерий семейства Enterobacteriaceae в определенной массе или объеме продукта. Для посева используют не менее трех последовательных кратных разведений. По 1 см исходной пробы и каждого последующего разведения вносят в жидкую неселективную среду не менее, чем в трех повторностях. Выбираемая последовательность разведений для посева зависит от предполагаемого уровня обсемененности продукта бактериями семейства Enterobacteriaceae или от нормативных значений.

Определение наиболее вероятного числа - в соответствии с таблицей приложения ДБ. Количество высеваемого продукта или его разведения и среды должно быть в соотношении не менее чем 1: При увеличении массы или объема высеваемой пробы продукта допускается использование селективных жидких сред двойной концентрации.

Подсчитывают на отобранных чашках количество выросших типичных колоний. При посеве методом мембранных фильтров на них подсчитывают колонии, если их менее Примечание - Дополнение введено в связи с тем, что поверхность мембранного фильтра намного меньше, чем чашки Петри. Выбирают по три типичных колонии каждого типа для пересева на поверхность питательного агара для дальнейшего подтверждения принадлежности выросших культур к бактериям семейства Enterobacteriaceae.

Внесенный в чашки продукт или его разведения распределяют по поверхности селективно-диагностической агаризованной питательной среды стерильным шпателем.

Химические вещества, используемые для приготовления питательных сред и реактивов должны быть аналитического качества, а вода дистиллированной. Среду разливают в стерильную посуду: Примечание - Дополнение введено в связи с тем, что использование сред двойной концентрации предусматривает добавление количества продукта или его разведения по объему, равному количеству среды, для этого должны использоваться пробирки большей вместимости.

Раствор переливают в мерную колбу вместимостью см и доводят водой до метки. Примечание - Пункт 6. Срок хранения расплавленной среды с момента ее приготовления - не более 4 ч. Примечание - Пункты 6. Непосредственно перед использованием подсушивают поверхность среды в чашках Петри, предпочтительно при снятых крышках и поверхностью агара, смотрящей вниз, в сушильном шкафу до тех пор около 30 мин , пока на поверхности агара не останется влаги.

Пробирки после стерилизации оставляют в вертикальном положении. Среду разливают по 6. Разливают среду по 6. Предусмотрено использование дополнительных питательных сред и реактивов, традиционно применяемых на территории государств, принявших стандарт, для выявления бактерий семейства Enterobacteriaceae.

Реактив готовят непосредственно перед использованием. Для определения оксидазы допускается использование дисков и растворов, зарегистрированных в порядке, действующем на территории государства, принявшего стандарт, промышленного производства. Для контроля качества дисков и растворов используют музейные оксидазоположительные и оксидазоотрицательные культуры. Растворы и реактивы для окраски по Граму, а также растворы, приготовленные по 6.

Приемлемой альтернативой посуды многоразового применения является одноразовая посуда, если она отвечает соответствующим требованиям. Допускается использование флаконов или бутылок с нетоксичными металлическими или пластиковыми завинчивающимися крышками.

Допускается применение других средств измерений, вспомогательного оборудования с аналогичными метрологическими и техническими характеристиками, а также материалов, по качеству не хуже указанных в разделе 7.

Для испытания должна быть отобрана и направлена представительная проба, не поврежденная и не измененная в ходе транспортирования или хранения. Примечание - Раздел 8 введен дополнительно в соответствии с требованиями межгосударственной стандартизации. При увеличении массы или объема высеваемой пробы продукта допускается использование селективных жидких сред двойной концентрации. Примечание введен в связи с тем, что непосредственный посев в селективные питательные среды для пищевых продуктов, в которых микроорганизмы не подвергнуты каким-либо сублетальным воздействиям, предусмотрен для упрощения испытания и сокращения его продолжительности.

Подсчитывают на отобранных чашках количество выросших типичных колоний. При посеве методом мембранных фильтров на них подсчитывают колонии, если их менее Примечание - Дополнение введено в связи с тем, что поверхность мембранного фильтра намного меньше, чем чашки Петри.

Выбирают по три типичных колонии каждого типа для пересева на поверхность питательного агара для дальнейшего подтверждения принадлежности выросших. Внесенный в чашки продукт или его разведения распределяют по поверхности селективно-диагностической агаризованной питательной среды стерильным шпателем.

Химические вещества, используемые для приготовления питательных сред и реактивов должны быть аналитического качества, а вода дистиллированной. Нагревают среду на слабом огне до кипения, кипятят мин, фильтруют через ватно-марлевый фильтр, доводят объем до 1 дм, охлаждают до температуры 45 С - 55 С.

Среду разливают в стерильную посуду: Примечание - Дополнение введено в связи с тем, что использование сред двойной концентрации предусматривает добавление количества продукта или его разведения по объему, равному количеству среды, для этого должны использоваться пробирки большей вместимости. Раствор переливают в мерную колбу вместимостью см и доводят водой до метки. Примечание - Пункт введен дополнительно в связи с тем, что в стандартах ИСО предусмотрено внесение красок в дегидратированную основу среды в сухом виде, а при приготовлении среды из отдельных компонентов, краски вносятся в виде растворов, см.

Срок хранения расплавленной среды с момента ее приготовления - не более 4 ч Раствор нейтрального красного Состав: Раствор переливают в мерную колбу вместимостью см и доводят водой до метки Раствор кристаллического фиолетового Состав: Непосредственно перед использованием подсушивают поверхность среды в чашках Петри, предпочтительно при снятых крышках и поверхностью агара, смотрящей вниз, в сушильном шкафу до тех пор около 30 мин , пока на поверхности агара не останется влаги.

Нагревают среду на слабом огне до кипения, кипятят мин, доводят объем до 1 дм, охлаждают до температуры 45 С - 55 С. Примечание - Изменение режима стерилизации среды введено в связи с тем, что среды Гисса с углеводами для предотвращения разложения углеводов стерилизуют при С. Пробирки после стерилизации оставляют в вертикальном положении. Примечание - Пункт введен дополнительно в соответствии с Селективная обогатительная среда среда Кесслера Состав: Предусмотрено использование дополнительных питательных сред и реактивов, традиционно применяемых на территории государств, принявших стандарт, для выявления бактерий семейства Enterobacteriaceae Реактив для определения оксидазы Состав: Реактив готовят непосредственно перед использованием.

Для контроля качества дисков и растворов используют музейные оксидазоположительные и оксидазоотрицательные культуры При приготовлении селективных жидких сред двойной концентрации количество ингредиентов или дегидратированной основы среды увеличивается в два раза, а количество воды остается без изменения Растворы и реактивы для окраски по Граму готовят по ГОСТ и ГОСТ Растворы и реактивы для окраски по Граму, а также растворы, приготовленные по 6.

Примечание введены дополнительно для отражения потребностей национальной экономики государства, принявшего стандарт. Приемлемой альтернативой посуды многоразового применения является одноразовая посуда, если она отвечает соответствующим требованиям. Допускается применение других средств измерений, вспомогательного оборудования с аналогичными метрологическими и техническими характеристиками, а также материалов, по качеству не хуже указанных в разделе 7. Соотношение количества высеваемого продукта и забуференной пептонной воды соответственно 1: При непосредственном посеве продукта в селективную среду в зависимости от требуемых пределов выявления, см, жидкой пробы или, см, исходной суспензии при использовании других продуктов переносят в пробирку, содержащую 10 см обогатительной селективной среды двойной концентрации для 1 см 10 см, или в пробирку, содержащую 10 см обогатительной селективной среды нормальной концентрации для 1 см.

При испытании высококислотных продуктов для предотвращения резкого снижения рн на 0,5 и более питательных сред рн питательных сред после внесения в них продукта или его разведения доводят до допустимых значений с помощью стерильного раствора гидроокиси натрия, приготовленного по ГОСТ , или при приготовлении питательных сред рн устанавливают выше заданного с учетом его последующего снижения при внесении продукта.

Количество добавляемого стерильного раствора гидроокиси натрия или величину, на которую необходимо увеличить рн при приготовлении питательных сред, устанавливают опытным путем.

Допускается доводить рн до нейтрального значения с помощью стерильного раствора гидроокиси натрия непосредственно в высококислотном продукте. Посевы непосредственно в селективную среду инкубируют в течение ч, через 24 ч проводят предварительный учет роста бактерий в среде, а через 48 ч - окончательный.

Примечание - Дополнение введено в связи с тем, что подкисление сред проводят для создания оптимальных условий роста микроорганизмов Выделение типичных колоний Используя петлю, пересевают культуры с селективной питательной среды с признаками роста на поверхность одной из селективно-диагностических сред, приготовленных по 6.

На глюкозном агаре с желчью и фиолетовым красным бактерии семейства Enterobacteriaceae образуют колонии розовые, красные или пурпурные с ореолом или без него. На среде Эндо бактерии семейства Enterobacteriaceae образуют колонии темно-красные с металлическим блеском или без него, розовые, прозрачные. Из каждой инкубированной чашки см , на которой обнаружены типичные колонии, выбирают по три хорошо изолированных колонии каждого типа и пересевают каждую.

Если через несколько секунд взвесь ослизняется и за петлей тянутся слизистые нити, то это указывает на принадлежность испытуемой культуры к грамотрицательному виду. У грамположительных бактерий слизистых нитей не образуется. Примечание - Пункт введен дополнительно в связи с тем, что бактерии семейства Enterobacteriaceae это, прежде всего, грамотрицательные бактерии, а при идентификации переходят от общих признаков к частным, поэтому прежде всего необходимо определить отношение выявленных бактерий к окраске по Граму Определение отсутствия оксидазы Используя платиново-иридиевую петлю проволоку или никель-хромовую или стеклянную палочку, отбирают культуры, выросшие на поверхности питательного агара см и наносят штрихами на фильтровальную бумагу, смоченную реактивом для определения оксидазы 6.

Результат испытания считают отрицательным, если фильтровальная бумага на месте нанесения штрихов не посинела в течение 10 с Определение ферментации глюкозы Для определения ферментации глюкозы испытуемую культуру высевают уколом в глюкозный агар 6. Бактерии семейства Enterobacteriaceae ферментируют глюкозу с образованием только кислоты цвет среды меняется или кислоты и газа По результатам дополнительного подтверждения к бактериям семейства Enterobacteriaceae относят факультативно-анаэробные, не образующие спор грамотрицательные оксидазоотрицательные палочки, сбраживающие глюкозу с образованием кислоты или кислоты и газа.

В каждую из трех пробирок с 9 см забуференнной пептонной воды вносят по 1 см первого десятикратного разведения продукта, если исходный продукт жидкий, или вносят по 1 см исходного разведения продукта, в случае нежидкого продукта. В каждую из трех пробирок с 9 см забуференнной пептонной воды вносят по 1 см второго десятикратного разведения продукта, если исходный продукт жидкий, или вносят по 1 см первого десятикратного исходного разведения продукта, в случае нежидкого продукта.

Каждое последующее разведение высевают, используя новую стерильную пипетку. Осторожно перемешивают инокулум и среду. Посев непосредственно в селективную питательную среду проводят в соответствии с Выделение типичных колоний, подтверждение принадлежности выделенных колоний к бактериям семейства Enterobacteriaceae Выделение типичных колоний, подтверждение принадлежности выделенных колоний к бактериям семейства Enterobacteriaceae проводят по Наиболее вероятное число бактерий семейства Enterobacteriaceae в 1 см или 1 г пробы продукта НВЧ рассчитывают исходя из числа посевов, в которых подтверждено присутствие этих бактерий.

Для определения наиболее вероятного числа пользуются таблицей ДБ.

You Might Also Like